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2024-3-14

一、精選內毒素更低批次細胞對內毒素非常敏感，過高的內毒素可誘導細胞釋放炎癥因子、引導細胞衰老或凋亡。不僅如此，胎牛血清會經常或長時間作用于細胞，一旦內毒素含量過高，細胞相當于長期在“有在毒培養基”中生長，被內毒素影響，細胞將處于“亞健康狀態”，進而影響實驗結果的穩定與準確性。因此，為保證細胞的健康，在培養細胞時，應該選用內毒素含量盡可能低的血清，以保障實驗的順利進行。Ausbian®進口特級胎牛血清，選擇內毒素含量≤3EU/ml，澳洲進口血源，曾經是細胞典藏等重大項目...

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提早知道所培養細胞或培養基中是否有細菌污染的一種方法培養細胞時，要避免細菌污染。如果存在細菌污染，則培養液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯，細胞大多在24小時死亡。在以細胞大規模培養為基礎的生物藥產業中，也需要進行無菌檢查。傳統無菌檢查是采用TSA或TSB培養基培養的方法，一般需要培養14天，觀察是否有菌落生長或溶液渾濁?，F介紹一種通過PCR進行無菌檢查的方法，當然該方法也是用于研究。即采用德國MB的細菌檢測試劑盒（OnarBacteriaDetectionKit）。它作為PCR試劑盒，針對的是細菌高度保守的16SrRNA序... 查看詳情 2020-11-17
PCR試劑盒靈敏度與方法驗證概說 PCR方法已廣泛用于科研，在工業中也有不斷擴大應用的趨勢，它包括檢測一些病原體、檢測支原體污染、檢測細菌污染以及檢測殘留宿主DNA等。PCR在工業中的應用主要存在一個方法驗證的問題，尤其是靈敏度的驗證。靈敏度不夠，就會發生漏檢。另外，PCR所直接面對的樣本是DNA，而非病原菌或DNA，因此還需要做DNA抽提，這也是要注意的。下面以支原體PCR檢測為例，略說說靈敏度的驗證。藥典規定，生物藥廠的主細胞庫、工作細胞庫、生產終末細胞、檢定細胞、病毒種子批和病毒收獲液、細胞培養相關材料... 查看詳情 2020-11-16
支原體 DNA染色法及其優缺點支原體有多種檢查方法，其中熒光法檢測支原體DNA是藥典記載的方法，又被稱為DNA染色法或指示細胞培養法。它的原理和操作大致如下：將供試品接種于指示細胞（無污染的Vero細胞或經國家藥品檢定機構認可的其他細胞，供試品應對該細胞生長無影響。下面以Vero細胞為例）中培養后，用特異熒光染料（如Hoechst33258）染色。Vero細胞經消化后，需制成每1ml含10的5次方的細胞懸液，以每孔0.5ml接種到6孔細胞培養板。每孔再加無抗生素DMEM培養基3ml，在細胞孵箱培養過夜，備... 查看詳情 2020-11-16
論適血清的篩選牛血清是重要的細胞培養添加成分，但目前牛血清的類型有胎牛血清、新生牛血清、補鐵新生牛血清等，其性能和價格均不相同。胎牛血清培養效果通常來說是jia。而補鐵新生牛血清對于一些細胞類型，其效果可等價于胎牛血清，或優于常規新生牛血清。三種血清價格也各不相同。適血清的選擇，與各實驗室、生產企業的條件和需求有關，與所培養細胞類型有關。除了以往根據經驗和文獻報道，必要時也可進行針對特定細胞的血清篩選試驗，以篩選出jia血清。2020年8月《生物學雜志》第4期刊登了一篇《不同類型牛血清對M... 查看詳情 2020-11-16
PCR檢查支原體是對藥典方法的重要補充支原體是導致體外細胞污染的重要污染源。用于生物制品生產的細胞基質或治療性細胞。產品被支原體污染后，支原體或支原體代謝產物可進入人體，并對人體產生嚴重危害。因此，對支原體污染的有效檢測是確保細胞基質及治療性細胞產品質量的前提。支原體傳統檢測方法為培養法和指示細胞染色法，這兩種均是“藥典方法”。但缺點是耗時長，靈敏度低。此外，這兩種方法均無法明確所感染支原體的類型。因此，采用PCR或qPCR檢測支原體的高度保守序列，用于制藥工業的放行檢測，逐漸成為一種趨勢。當然，核酸擴增法也存在... 查看詳情 2020-11-13
DNA污染監測的一種方法對于高靈敏的PCR技術來說，少量的DNA污染就可導致PCR假像或假陽性。污染的DNA來自于氣溶膠中DNA的片段。這些氣溶膠中的DNA可源自離心機、移液器和其它實驗室設備，或從PCR反應管中飛濺出來。它們很難去除，并可能導致樣品之間的交叉污染。在擴增過程中檢測到的單個外源DNA分子，就可給整個實驗過程和結果詮釋帶來很多問題。不幸的是，即使是經驗豐富的實驗室，DNA污染也會偶爾發生，并且只有當PCR檢測到時，才會引起注意。值得指出的是，桌面和實驗室工作區，以及分子生物學實驗室中的... 查看詳情 2020-11-13

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